バイオメディカル電顕リサーチサイト  BioMedical EM Research Site

CLEM観察法
Correlative Light and Electron Microscopy

宮崎大学医学部解剖学講座 超微形態科学分野
Department of Anatomy, Ultrastructural Cell Biology
Faculty of Medicine, University of Miyazaki



トルイジンブルー染色法
Toluidin blue staining


 はじめに0.5%のトルイジンブルー染色液を調製し、10 mlの注射シリンジに吸引した後、染色液中のゴミ等を除去するためのシリンジフィルター(sartorius社製Minisart孔径=0.20 µmを介して23Gの注射針を装着します。



準超薄切片作製法で紹介した通り、スライドガラス上の水滴に切片を浮かべ、
ホットプレートで切片を伸展させながらスライドガラスに密着させます。






水滴が蒸発した後、スライドガラスが熱いうちにトルイジンブルー
染色液を滴下し、2〜3秒経過後、直ちに水洗します。





 ブロワーで水滴を飛ばした後、顕微鏡で観察します。




切片が小さく、顕微鏡の視野に捉えやすいようにスライドガラスの
「裏側」から周囲をペンで囲んでおきます(右写真)





対物レンズはノンカバー用 x60 をお奨めします

樹脂包埋切片はパラフィン切片に比べて解像度が良く、比較的細かい構造まで観察できます。


ラット脊髄前角


準超薄切片再包埋法へ

CLEM観察法トップページへ