固定液調製法 Fixative solution
電子顕微鏡試料作製に用いる固定液の作製法をご紹介します。
電子顕微鏡観察では「2% パラフォルムアルデヒド／2.5% グルタルアルデヒド／0.1M リン酸緩衝液（pH 7.4）」の組成が標準的に使用され、試料の特性に応じて濃度が調整されます。
8% パラフォルムアルデヒド溶液調製
約90 mlの蒸留水にパラフォルムアルデヒド粉末8 gを溶解後、蒸留水を加えて100 mlとします。パラフォルムアルデヒドは溶解しにくいため、100 ml当たり2〜3滴の1N NaOHを添加し、60〜70℃のホットプレート付スターラーで攪拌します。
蒸気が角膜や咽頭を刺激しないよう、ドラフトチャンバー内でアルミホイルで蓋をして攪拌します。約20分間の攪拌で溶解した後、念のためフィルターペーパーを通して濾過します。
2% パラフォルムアルデヒド／2.5% グルタルアルデヒド／0.1M リン酸緩衝液, pH 7.4調製
最終容量 100 ml 当たり
8% パラフォルムアルデヒド 25 ml／50% グルタルアルデヒド 5 ml／0.4M リン酸緩衝液（pH 7.4）25 ml／蒸留水 45 ml
※ 注） ストック用の0.4M リン酸緩衝液を冷蔵保存すると、微細なリン酸結晶物が形成されて観察の妨げとなるため、室温で保管して下さい。