バイオメディカル電顕リサーチサイト  BioMedical EM Research Site

透過型電子顕微鏡 試料作製法
Sample Preparation for TEM Observation

宮崎大学医学部解剖学講座 超微形態科学分野
Department of Anatomy, Ultrastructural Cell Biology
Faculty of Medicine, University of Miyazaki



トルイジンブルー染色法
Toluidin blue staining


 はじめに0.5%のトルイジンブルー染色液を調製し、10 mlの注射シリンジに吸引した後、染色液中のゴミ等を除去するためのシリンジフィルター(sartorius社製Minisart孔径=0.20 µmを介して23Gの注射針を装着します。



準超薄切片作製法で紹介した通り、スライドガラス上の水滴に切片を浮かべ、
ホットプレートで切片を伸展させながらスライドガラスに密着させます。






水滴が蒸発した後、スライドガラスが熱いうちにトルイジンブルー
染色液を滴下し、2〜3秒経過後、直ちに水洗します。





 ブロワーで水滴を飛ばした後、顕微鏡で観察します。




切片が小さく、顕微鏡の視野に捉えやすいようにスライドガラスの
「裏側」から周囲をペンで囲んでおきます(右写真)





対物レンズはノンカバー用 x60 をお奨めします

樹脂包埋切片はパラフィン切片に比べて解像度が良く、比較的細かい構造まで観察できます。


ラット網膜


ラット脊髄前角

染色が濃すぎた場合(左下写真)は、切片に100%エタノールを滴下して
数秒後に水洗(右下写真)すると調整できます。



染色が薄い場合には再度、ホットプレートで加熱した後、
追加染色を行うことが出来ます。

TEM試料作製法トップページへ